Plateau – Exploration des fonctions plaquettaires

Présentation

Le plateau technique “Hémostase & étude de la fonction plaquettaire” est ouvert à la communauté scientifique et académique ou industrielle. Il est né de l’étroite collaboration entre le laboratoire d’hématologie Immunologie de l’hôpital Bichat et l’équipe 6 de l’unité Inserm du laboratoire des sciences vasculaires translationnelles (UMRS1148, LVTS).

Ce plateau permet l’étude de la fonction des plaquettes sanguines et de la coagulation : par mesure de l’agrégation en réponse à divers agonistes, de quantifier les récepteurs et les marqueurs d’activation plaquettaires par cytométrie en flux. Des microscopes à fluorescence équipés de caméra à haute résolution permettent également l’étude de la formation du thrombus en temps réel à force de cisaillement veineux ou artériel en chambre de flux.

Activités

Expertises

La proximité de l’EFS de l’hôpital Bichat et d’une convention avec l’Inserm permet d’obtenir des produits sanguins d’origine humaine qui seront analysées des manières suivantes par le plateau :

– Numération de la formule sanguine (humain et murin), nombre de globules blancs et % ; globules rouges de plaquettes (VPM), taux d’hémoglobine et d’hématocrite volume globulaire moyen (VGM) etc…
– Production des produits dérivés du sang par centrifugations séquentielles : Plaquettes lavées, plasma pauvre et riche en plaquettes.
– Détermination des paramètres de la coagulation en sang total et en milieu plasmatique : temps de coagulation, temps et vitesse de formation du thrombus, fermeté et élasticité du caillot, temps de lyse du caillot.
– Test de génération de thrombine par thrombinographie : mesure du temps de latence, du potentiel endogène de thrombine (aire sous la courbe) et de la quantité maximale de thrombine (hauteur du pic).
– Identification par cytométrie en flux des marqueurs d’activation plaquettaire (exposition de P-Selectine ou de phosphatidylserine et activation de l’intégrine GPIIbIIIa.
– Quantification des récepteurs plaquettaires (GPscreen).
– Étude de l’adhésion des plaquettes aux matrices du sous endothélium en condition de flux.
– Étude de la formation du thrombus en temps réel à force de cisaillement veineux ou artériel en chambre de flux.”

Equipements

Le plateau technique est équipé de :
– 2 Hémocytomètres Horiba  pour la numération des cellules sanguines (Humain et murin) : ABX Pentra60 et un Scil Vet abc Plus.
– 3 centrifugeuses avec adaptateurs pour le fractionnement des produits sanguins vWR micro Star17 et Mega Star 600R, Sigma 3-15 et une Beckman Avanti J-E.
– 2 APACT4004, Elitech thermostaté à lumière transmise pour la mesure de l’’agrégation des plaquettes.
– 2 analyseurs Rotem delta permettant d’étudier les caractéristiques de formation du caillot dans 8 cuves réactionnelles de 300µl. L’ensemble des paramètres de la coagulation sont calculés (CT, CFT, CFR, MCF, MCE, ML, LOT, LT, AUC) en plus du profil global de réaction (TEMogram).
– La thrombinographie est effectuée en plaque de microtitration de 96 puits avec un lecteur de plaque à fluorescence thermostaté de type Fluoroskan Ascent équipé d’un injecteur.
– Cytomètre de type BD Accuri C6 Plus pour la mesure des marqueurs d’activation plaquettaire ainsi que la quantification des récepteurs.
– 2 microscopes à fluorescence pour évaluer l’adhésion des plaquettes et la formation du thrombus en temps réel à cisaillement veineux ou artériel en chambre de Flux.
– Microscope à fluorescence Leica et un Zeiss avec système d’illumination par épifluorescence à monochromateur (DMRIB) et caméra DP30W (Olympus) avec des objectifs à longue distance (X20 et X40).
– Chambre de flux (Cellix) et 2 pompes à débit controlé (Exigo).

Services proposés

Le plateau propose un accompagnement complet, de la collecte du sang à la préparation des produits labiles dérivés ainsi qu’à l’utilisation des appareils dédiés aux mesures des paramètres de la coagulation. Si besoin, nous mettons à la disposition des utilisateurs.trices les protocoles et fiches techniques des produits et réactifs spécifiques à l’étude de la fonction des plaquettes sanguines humaines et murines et aux expériences en chambre de flux.

Nous apporterons également notre expérience et notre savoir-faire à l’étude des plaquettes de patients avec le soutien du centre de référence des pathologies plaquettaires auquel nous sommes rattachés.