Plateforme Leducq de cytométrie en flux du PARCC

Présentation

Activités

Expertises

En accompagnant les équipes de recherche du PARCC, la plateforme a développé une expertise dans l’étude des leucocytes, cellules endothéliales ou précurseurs de cardiomyocyte, issus de tissus complexe tels que le cœur, le rein ou l’aorte. Nous accompagnons les chercheurs dans le développement de leurs protocoles pour identifier et isoler ces populations rares.
La plateforme s’est également spécialisée dans la caractérisation de vésicules extracellulaires chez la souris et chez l’homme.

Équipements

Analyseurs

• Becton Dickinson LSRForessaTM X-20 : 5 lasers (375 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm et 640 nm), 20 paramètres (2 scatters et 18 fluorescences) ;
• Beckman Coulter CytoFLEX : 3 lasers (405 nm ; 488 nm et 638 nm), 13 paramètres (3 scatters et 10 couleurs). Ce cytomètre est dédié à l’étude des vésicules extracellulaires. En effet, le Side Scatter peut être mesuré sur les lasers bleu et violet, permettant ainsi de d’identifier des particules de 100 nM par rapport au bruit de fond de l’instrument.

Trieur cellulaire
Becton Dickinson FACSAria III cell sorter: 4 lasers (355nm, 405nm, 488nm et 640 nm), 15 paramètres (13 couleurs et 2 scatters).
Cet instrument permet de trier en condition stériles jusqu’à 4 populations de cellules simultanément, en tubes, en plaque ou sur lame. Le trieur est placé dans une enceinte de confinement de classe II (hotte Noroit), pour assurer la protection du manipulateur et de environnent.

Cytométrie en image
Luminex Amnis ImageStream MKII: 3 objectifs (20x, 40x et 60x), 2 cameras Hamamatsu, 4 lasers (350nm, 488nm, 561nm et 633 nm), 12 couleurs et 2 scatters.
Cette technologie combine la rapidité, la sensibilité et les capacités de phénotypage de la cytométrie en flux avec l’imagerie de la microscopie et offre ainsi un large éventail d’applications. Ce cytomètre est notamment un outil puissant pour l’étude des vésicules extracellulaire grâce aux caméras et à l’objectif 60x qui permettent de quantifier et caractériser les EV précisément.

Services proposés

Formation
La plateforme forme les nouveaux utilisateurs jusqu’à ce qu’ils puissent réaliser leurs expériences indépendamment. Notre objectif est de garantir la qualité des données générées et de fournir une formation continue aux utilisateurs de la plateforme.

Ainsi la plateforme organise plusieurs sessions de formation :

• Formations théoriques : plusieurs cours de 1h qui s’adressent aux débutants et utilisateurs expérimentés (principes de la cytométrie, design de panel et analyse non supervisée) ;
• Une formation pratique de 3h en petit groupe avec réalisation d’une expérience sur cytomètre ;
• Formation à l’analyse FlowJO sur une journée assurée par le spécialiste des applications BD.

Expertise-conseil

• Nous proposons une assistance personnalisée pour chaque nouveau projet ;
• Nous accompagnons les chercheurs avec le design de leur panel ;
• Nous fournissons des conseils dans leur procédures expérimentales et l’analyse de leurs résultats.

Tri cellulaire
La plateforme assure les tris cellulaires pour les utilisateurs ; elle propose une formation aux utilisateurs qui souhaitent devenir indépendants.”