Plateforme d’Histologie de SFR Necker

Présentation

La plateforme d’histologie dispose actuellement de l’ensemble des équipements nécessaires à la réalisation des techniques histologiques de routine sur les prélèvements fixés, congelés ou frais, de la possibilité de virtualiser vos lames histologiques. La plateforme possède également des équipements spécifiques permettant la réalisation de reconstructions en 3D d’échantillons marqués (OHREM) et de projets de microdissection laser.

Notre mission est de prendre en charge vos échantillons selon votre demande (inclusion, coupe, coloration et/ou scan de lame en fond clair ou en fluorescence, HREM) et de former les utilisateurs sur différentes techniques histologiques (inclusion, immunohistochimie) et sur nos différents postes de travail disponibles à la réservation (microtome, cryostat, vibratome et microdissecteur laser).

Nous mettons à votre disposition notre expérience et la technologie de cette plateforme.
La plateforme est ouverte aux équipes académiques et privées des autres sites.
Nous serons heureux de vous aider avec des analyses spécifiques et de routine dans vos projets de recherche.

Activités

Expertises

Nous prenons en charge les échantillons aux différentes étapes du processus d’histologie.
Nous conseillons et accompagnons les utilisateurs dans leur projet, sur la préparation des échantillons, les techniques d’histologie en fonction de leurs objectifs.
Nous travaillons sur divers modèles, la souris (embryon et adulte), le rat, le lapin, le poisson zèbre (stade larvaire et adulte) et le cochon, et nous traitons une grande variété de tissu, ainsi que des organoïdes.
Nous adaptons la coupe à la demande de l’utilisateur (coupes sériées, avec des niveaux, recherche de zone d’intérêt…).

Équipements

La plateforme est équipée :

• 1 automate d’infiltration des tissus sous vide (ASP300S, Leica) , 1 plaque d’inclusion (EC-350, Microm France) et 1 déparaffineur de cassette (TR 302, Tech-Inter) pour réaliser les blocs de paraffine ;
• 4 microtomes semi-automatiques (2 x HM 340E, Microm France, 1 RM2245 et 1 RM2145, Leica) pour la réalisation des coupes en paraffine ;
• 1 imprimante de lame (SlideMate, Thermo) pour l’écriture des lames ;
• 1 cryostat (CM3050S Leica) pour la réalisation de coupes congelées ;
• 1 vibratome (VT1200) pour la réalisation sur tissus frais ;
• 1 multistainer (ST5020-CV5030, Leica) permettant de réaliser les colorations classiques et spécifiques des tissus et d’effectuer le montage avec lamelle ;
• 1 microscope (DME, Leica) permettant un contrôle constant de la qualité des coupes et des colorations ;
• 1 scanner de lame (Nanozoomer 2.0 HT, Hamamatsu) afin de réaliser des lames virtuelles en fond clair ou en fluorescence (20x NA 0.75 à grossissement global 20X ou 40X, capacité 210 lames) ;
• 1 Microdissecteur Laser (Palm MicroBeam, Zeiss qui permet d’étudier des acides nucléiques (ADN/ARN) et des protéines de sous-populations cellulaires spécifiques ;
• 1 OHREM (Optical High Resolution Episcopic Microscope, Indigo Scientific) pour l’étude 3D des tissus inclus en résine ;
• 1 loupe binoculaire (Stemi 508, Zeiss) pour l’inclusion en résine ;
• 1 Codex Fusion System (Akoya) pour l’analyse phénotypique des cellules dans un contexte tissulaire (IF multiplex).

Services proposés

Les prestations de routine
La plateforme prend en charge vos échantillons et réalise les prestations de votre choix :

• l’inclusion en paraffine ;
• la coupe : en congélation (5-30µm) et/ ou en paraffine (4µm) et/ou sur tissus frais ;
• les colorations histologiques : coloration standard (Hématoxyline – Eosine, Bleu de toluidine) ou colorations spécifiques du collagène (Trichrome de Masson, Picro-sirius), des polysaccharides (Periodic Acid Schiff) ;
• la virtualisation de lames en lumière blanche et en fluorescence ;
• l’inclusion d’échantillon en résine à destination de la coupe sur l’OHREM ;
• la coupe d’échantillon inclus dans une résine et acquisition d’images grâce à l’OHREM.

La plateforme assure aussi la formation des utilisateurs :

• à l’utilisation des équipements de microtomie : microtome, cryostat et vibratome ;
• à la mise au point de marquages immuno-histochimiques ;
• à la microdissection laser (formation et accompagnement).