Plateforme de cytométrie en flux – Cyto’CRI

Présentation

La plateforme de Cytométrie en flux du CRI (CytoCRI) est ouverte à toute personne désirant utiliser les équipements proposés par l’infrastructure qu’elle appartienne à une structure académique ou industrielle. Historiquement, les cytomètres des unités 699 et 773 (Centre de Recherche Biomédical Bichat Beaujon) ont été mis en commun au moment de la création du centre de recherche sur l’inflammation en 2014. La volonté du centre était de permettre aux différentes équipes des deux départements et au-delà, aux unités du site de développer et utiliser cette technologie.
Depuis 2018, elle se tourne vers l’extérieur avec l’acquisition de nouveaux matériels : trieur, cytomètre en flux et en images, lecteur de plaque en électrochimioluminescence (Mesoscale).
La plateforme propose aujourd’hui la possibilité de se former aux techniques d’acquisition, de traitement et d’analyses des échantillons mais propose également une aide sous forme de prestation pour les projets nécessitant la maitrise de cette technologie.

Activités

Expertises

Notre plateforme de cytométrie en flux permet d’analyser différents marqueurs fluorescents sur un grand nombre de cellules en suspension. Elle permet ainsi de phénotyper des cellules mais aussi d’analyser des phénomènes biologiques tels que la viabilité cellulaire, la prolifération, l’apoptose ou le cycle cellulaire. Elle permet, en outre, de faire des dosages en multiplex de cytokines par exemple, de flux calcique mais aussi de quantifier des protéines phosphorylées. De plus, la plateforme dispose d’un ImageStream qui allie cytométrie et microscopie. Il permet de visualiser les marqueurs fluorescents au sein de la cellule (par exemple translocation nucléaire ou colocalisation) sur cellules en suspension ou à partir de cellules adhérentes cultivées en 2D ou en 3D (sphéroïdes par exemple).

Équipements

• 3 cytomètres analyseurs :
  • Guava Easycyte (2 lasers, 6 paramètres, 4 couleurs) ;
  • Fortessa LSR (4 lasers, 18 paramètres, 16 couleurs) ;
  • Fortessa LSR X20 (5 lasers, 20 paramètres, 18 couleurs) ;
• 1 trieur (Melody – 3 lasers, 7 couleurs) ;
• 1 cytomètre en flux et en images (ImageStream MKII – 5 lasers, 12 canaux, grossissements x20, x40 et x60) ;
• 1 lecteur de plaque d’électrochimiluminescence pour le dosage de metabolitse (MesoSCale Discovery, QuickPlex SQ 120).

Services proposés

• Une formation théorique de 2h et une formation pratique sur les différents matériels (à l’exception de l’ImageStream) ;
• Pour les utilisateurs autonomes (formation suivie et charte signée) sur les analyseurs, trieur et lecteur de plaque :
  • mise à disposition des matériels et de leurs consommables ;
  • assistance pour le design des panels, lors de l’acquisition des données ou de leur analyse (logiciels dédiés : FlowJo, Diva, FacsChorus, Incyte, Ideas avec prêt d’une licence ou accès à un poste d’analyse) ;
• Prestations de service (obligatoires pour l’ImageStream) : un ingénieur dédié assure la prestation : de la définition de la question scientifique à l’analyse des résultats en concertation avec le porteur du projet.