Plateforme vecteurs Viraux et Transfert de Gènes

Présentation

La plateforme Vecteurs Viraux et Transfert de Gènes (VVTG) est une plateforme d’Université Paris Cité située sur le site de la Faculté Necker qui réalise des productions virales à façon pour les chercheurs des laboratoires académiques nationaux, ainsi que des immortalisations de lymphocytes B et T.
L’offre de virus recombinants de transfert de gènes concerne la production de Lentivirus, de Rétrovirus et d’Adénovirus, de grade recherche et défectifs pour la réplication.
Le personnel de la plateforme VVTG réalise avec expertise l’ensemble des prestations de production et de titrage des virus en proposant :
1) des types viraux diversifiés pouvant couvrir de nombreuses applications de transfert de gènes,
2) des conditionnements de production adaptés aux applications de transfert de gènes in vitro ou in vivo,
3) des contrôles de qualité,
4) des productions virales tests,
5) des outils viraux de type.

Les vecteurs viraux sont performants pour leur capacité à transférer du matériel génétique dans les cellules cibles infectées. Ils sont utilisés comme outils pour moduler l’expression de gènes par surexpression ou répression (shRNA, miRNA), mais aussi pour l’introduction de modifications dans le génome des cellules infectées à l’aide du système CRISPR-CAS-9.
L’immortalisation des LB et LT peut être réalisée à partir d’un même échantillon sanguin de patient à l’aide des virus EBV et Saïmiri. Cette prestation permet l’étude de maladies rares affectant le système immunitaire.

Activités

Expertises

Le personnel de la plateforme VVTG constitué de quatre personnes, est expert en vectorologie virale pour les virus proposés, ainsi qu’en immortalisation de cellules lymphoïdes. Nous avons également une activité de conseils, d’aide à la définition et à la prise en charge de projets. Une expertise sur le risque biologique, l’activité en locaux confinés L2-L3, en règlementation sur les OGM et sur la gestion d’échantillons humains.
Nous réalisons l’ensemble des prestations dans nos locaux L1 et L2 en accord avec la règlementation sur les OGM de classe 1 et de classe 2 (productions de virus avec inserts de type A). Nous disposons d’un agrément OGM à cet effet.
Nous développons également l’ouverture début 2023, d’un grand L3 sur la Faculté de santé Necker pour : 1) la réalisation de productions de virus OGM de classe 3, avec inserts de type B par le personnel VVTG, mais également 2) l’accès au L3 d’utilisateurs ayant un projet mettant en jeux des microorganisme sauvages relevant d’un confinement L3, mais également tout OGM de groupe III, classe 3. C’est un nouvel outil de recherche qui sera ouvert à la communauté scientifique.

Equipements

La plateforme dispose d’équipement d’infrastructure avec ses locaux L1 (54 m2), L2 (44 m2) et L3 (83 m2).
Ses L1 et L2 sont équipés du matériel de laboratoire nécessaire à ses activités :

•  5 PSM II
• 4 incubateurs CO2
• 1 incubateur bactériologie
• 1 -80°C
• 2 ultracentrifugeuses + rotors
• 4 centrifugeuses
• 1 FPLC
• 4 réfrigérateurs
• 4 congélateurs -20°C

Son L3 fait l’objet de demandes de financement pour compléter son équipement avant ouverture, en parallèle du matériel que la plateforme VVTG a acquis pour sa propre activité en L3.

Services proposés

Trois axes de service :

• Conseils projet et mise en œuvre,
• Productions de virus recombinants de transfert de gènes de grade recherche, défectifs pour la réplication, OGM de classe 2, produits en L2
• Immortalisations de cellules immunitaires.

Les 10 offres de service majeures de la plateforme :

1. Conseils prise en charge projet, types vecteurs viraux, utilisation virus, règlementation OGM et immortalisations cellulaires
2. Production lentivirus delta U3 (SIN), enveloppe VSV-G,
3. Production rétrovirus MLV, enveloppes VSV-G
   Echelles de productions de Lentivirus et rétrovirus adaptées aux besoins : 200, 126, 78 et 39 ml de surnageant viral récolté.
4. Dosage des virus par infection de cellules cibles : FACS (fluorophore), PCR quantitative (LTR viraux), Sélection de résistance
5. Production adénovirus de sérotype 5, delta E1 / delta E3 : amplification et purification d’adénovirus en unités de production de 4, 3, 2 et 1 triple flask.
6. Génération de nouvelles particules adénovirales
7. Dosage des adénovirus technique plages de lyse
   Rendu des résultats de production / titration virales
8. Vecteurs viraux outils : GFP, CRE recombinase, Béta galactosidase et aliquotes viraux pour tests
9. Immortalisation de lymphocytes B par le virus EBV (Epstein Barr)
10.  Immortalisation de lymphocytes T par le virus HSV (Saïmiri).