Plateforme de Neuroinflammation de NeuroDiderot

Présentation

L’inflammation cérébrale a été décrite comme l’un des facteurs majeurs de la survenue des maladies du neuro-développement et des maladies neurodégénératives. L’inflammation cérébrale est notamment caractérisée par une réactivité accrue des cellules gliales (microglie et astrocytes) et peut s’accompagner d’une perméabilité de la barrière hémato-encéphalique et d’une infiltration de leucocytes. Caractériser ces processus inflammatoires pour comprendre l’influence exercée par ces cellules et les molécules qu’elles libèrent sur les fonctions cérébrales est un enjeu majeur des recherches cliniques et expérimentales dans nombreuses pathologies cérébrales.

En s’appuyant sur l’expertise d’une équipe expérimentée de chercheurs et d’ingénieurs ainsi que sur un équipement de pointe, la plateforme de neuroinflammation de l’unité NeuroDiderot UMR 1141 de l’hôpital Robert Debré intègre un ensemble très complet de technologies et d’expertises pour l’analyse pour accompagner les équipes de recherche dans l’analyse des processus inflammatoires affectant le système nerveux.

Activités

Expertises

Notre plateforme possède une expertise particulièrement pointue dans l’analyse de l’inflammation cérébrale et en particulier la réactivité microgliale et astrocytaire.
Nous possédons également une expertise dans la différenciation des oligodendrocytes immatures.

Nous avons développé depuis 10 ans le tri cellulaire magnétique en utilisant des anticorps adaptés (CD11B, CD11B/C, P2RY12, ACSA1, ASCA2, O4, PDGFRa) à partir de cerveaux de rat ou de souris, sains ou pathologiques, de la naissance à l’âge adulte. Cette technologie, qui est actuellement la technique de référence dans la séparation des cellules est compatible avec toutes les applications proposées par notre plateforme.

Nous avons également développé une expertise dans l’analyse de sous-populations de cellules microgliales, astrocytaires et oligodendrocytaires murines, in vivo dans le cerveau par des approches en cytométrie en flux.

Nous sommes également expert dans l’analyse des processus neuroinflammatoires in vitro, sur des cultures primaires de microglie.

Equipements

– Gentle MACS Octo Dissociato MACS miltenyi
– MultiMACS™ Cell24 Separator
– Hamilton microlab nimbus
– CFX384 Touch Real-Time PCR Detection System Biorad
– Bio-Plex 200 Systems Biorad
– Cytomètre BD LSR Fortessa X 20 Cell Analyzer- Flow Cytometer
– Luminomètre

Les Analyses du transcriptome et de l’épigénome se font par l’intermédiaire des plateformes  académique française de génomique et de bio-informatique (https://www.france-genomique.org).

Services proposés

Cytométrie en flux :
Notre plateforme à mis au point des panels d’anticorps permettant d’analyser et quantifier les populations microgliales, astrocytaires et oligodendrocytaires.

Tri cellulaire :
Notre plateforme propose le tri cellulaire magnétique de microglie (CD11B, CD11B/C, P2RY12), d’astrocytes ( ACSA1, ASCA2)  et d’oligodendrocytes (O4, PDGFRa).
Cette technologie  est compatible avec toutes les applications proposées par notre plateforme :
• Analyses à grandes échelles des cytokines et chimiokines (Luminex)
• Analyses du transcriptome et de l’épigénome RT-qPCR, RNA-sequencing, ATAC-sequencing)
• Analyses spécifiques des modifications de l’expression protéique (ELISA)
• Analyse de la libération des espèces réactives de l’oxygène

Nous proposons également une analyse des processus neuroinflammatoires in vitro, sur des cultures primaires de microglie. Après modulation de diverses cibles moléculaires (par l’utilisation d’agent pharmacologiques ou par la transfection d’ARN interférants) notre plateforme propose une étude complète de l’activation microgliale :
• Analyses du phénotype (RT-qCR, immunocytochimie) et des cytokines/chimiokines (Luminex)
• Analyses spécifiques des modifications de l’expression génique et protéique

Neuroprotection
Nous possédons une grande expertise dans l’évaluation des propriétés anti-inflammatoires et neuroprotectrices de molécules (sur les oligodendrocytes ou les neurones) dans des modèles de pathologies neurologiques.