rAAV Platform for R&D purposes (rAAV platform, rAAV vectors platform) de l’Institut Imagine

Présentation

L’objectif de la plateforme rAAV est une production à plus grande échelle et l’ouverture de cette installation à toutes les équipes de l’Institut Imagine ainsi qu’à d’autres instituts de recherche.
Le système de production a été mis en place sur la base d’une technologie publiée qui présente plusieurs avantages en termes de flexibilité de fabrication de sérotypes multiples, de rendements jusqu’à ~1E14 vg par série, de pureté et de puissance. Le même protocole est utilisé pour la purification de tous les vecteurs AAV, quel que soit leur sérotype.
La plateforme est capable de produire des vecteurs rAAV pour l’expression de transgènes thérapeutiques, de gènes rapporteurs (GFP, luciférase), de particules de capside vides (particules AAV sans génome à l’intérieur) ainsi que des vecteurs rAAV associés à des vésicules extracellulaires (exo-rAAV).
La capacité de culture tissulaire peut atteindre 100 flacons (RB) par semaine, ce qui permet de produire en temps voulu de petites et de grandes quantités de vecteurs pour accompagner à la fois les études de recherche et les études précliniques sur les animaux de petite et de grande taille.
La purification des vecteurs a été améliorée et rationalisée, par exemple la clarification du lysat de cellules brutes permet la visualisation directe des bandes de vecteurs sur le gradient de chlorure de césium (CsCl) utilisé pour la purification des vecteurs. Les préparations d’AAV sont extrêmement pures, sans capside vide, avec une teneur minimale en

Activités

Expertises

La plateforme est capable de produire des vecteurs rAAV pour l’expression de transgènes thérapeutiques, de gènes rapporteurs (GFP, luciférase), de particules de capside vides (particules AAV sans génome à l’intérieur) ainsi que des vecteurs rAAV associés à des vésicules extracellulaires (exo-rAAV).
La capacité de culture tissulaire peut atteindre 100 flacons (RB) par semaine, ce qui permet de produire en temps voulu de petites et de grandes quantités de vecteurs pour accompagner à la fois les études de recherche et les études précliniques sur les animaux de petite et de grande taille.
La purification des vecteurs a été améliorée et rationalisée, par exemple la clarification du lysat de cellules brutes permet la visualisation directe des bandes de vecteurs sur le gradient de chlorure de césium (CsCl) utilisé pour la purification des vecteurs. Les préparations d’AAV sont extrêmement pures, sans capside vide, avec une teneur minimale en

Equipements

Roller bottles incubator;
ultracentrifuge;
-80°C

Services proposés

Notre plateforme a pour but de produire des rAAV à un prix raisonnable pour les différents projets de R&D de votre laboratoire.

Comment ?
Pour la production des vecteurs AAV (rAAV) vous devez fournir votre plasmide d’intérêt à vectoriser. La quantité exacte de plasmide nécessaire dépend de l’échelle de production que nous déciderons ensemble en tenant compte du type d’expérimentation (in vitro ou in vivo), du sérotype choisi, de la taille du transgène, etc.

Combien de temps ?
Le temps de production des rAAV est d’environ 3 semaines.

Quels types d’AAV ?
Les sérotypes d’AAV disponibles pour la production sont : AAV1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, rh10 etc.

Quelle capacité d’encapsidation ?
La capacité d’encapsidation est d’environ 4,5 Kb mais il est envisageable de vectoriser des transgènes plus grands, jusqu’à une certaine taille. Tout cela doit être discuté.

Quel rendement ?
Le rendement attendu pour une production standard est >1 ×10¹³ total VG (vector genome) d’AAV purifiés pour la plupart des sérotypes. Notre plateforme est connue pour son fort rendement. Toutefois, certains gènes sont toxiques pour les cellules et certains sérotypes (p. ex. AAV6) sont à faible rendement.

Quelle échelle de production ?
Nous proposons différentes échelles de production, cette décision est prise ensemble selon les besoins du projet.

Quels tarifs ?
Le prix pour la production et le devis seront établis après discussion.