enSCORE (engineered Spinal and Cortical Organoid coRE”)

Présentation

La plateforme enSCORE a été créée en 2021 pour apporter un support à un consortium interdisciplinaire de chercheurs qui s’intéressent au développement embryonnaire du système nerveux central et ses dérégulations par des mutations génétiques retrouvées dans des pathologies infantiles. Elle vise à faciliter l’accès aux chercheurs à des organoïdes neuraux dérivés de cellules souches pluripotentes induites humaines (iPSC). Ces organoïdes sont les seuls modèles du développement prénatal du cerveau et de la moelle épinière chez l’homme. Ils présentent aussi l’avantage de permettre une exploration du développement en combinant des approches de génétique, de biologie cellulaire et moléculaire et de pharmacologie.

La plateforme est financée par le Labex Université Paris Cité « Who am I ? » dans le cadre du projet transversal (Organoïdes neuraux pour étudier les interactions entre les signaux mécaniques et transcriptionnels qui sous-tendent le neurodéveloppement normal et pathologique).

Activités

Expertises de la plateforme enSCORE

L’optimisation, la standardisation et la caractérisation de cultures d’iPSC humaines
La plateforme a mis en place et offre un soutien et une formation à la culture de d’iPSC humaines ainsi qu’une caractérisation de la qualité de ces cellules (absence de mycoplasmes, marqueurs de pluripotence, intégrité chromosomique, potentiel de différenciation).

Le design et la génération de lignées transgéniques par édition du génome
En interaction avec les membres des équipes intéressées et du plateau GENIE (http://parisepigenetics.com/gen/), la plateforme met en place des procédures de modélisations de pathologies, en reproduisant les mutations présentes chez les patients par des approches d’édition du génome avec les systèmes CRISPR/Cas dans des lignées d’iPSC.

 La production et la caractérisation d’organoïdes neuraux (cérébraux et spinaux)
La plateforme emploie des protocoles variés (fournisseurs, publiés, ou mis au point par des collaborateurs) pour générer les organoïdes cérébraux et spinaux et forme les utilisateurs. Les organoïdes générés sont phénotypés par analyses de coupes fines au cryostat et marquage par immunofluorescence ainsi que par cytométrie en flux (Plateforme Imagoseine).”

Équipements

La plateforme dispose d’une pièce de culture cellulaire de confinement L2 complètement équipée pour la culture des iPSC et la différentiation des organoïdes.

• Deux PSM réservables en ligne ;
• Deux incubateurs CO2.

Les équipements spécifiques comprennent notamment :

• Une loupe binoculaire (Dynascope Lynx, Vision Engineering) placée sous PSM permettant l’observation et la manipulation stérile des cultures. Cette loupe est équipée d’un système vidéo relié à un écran permettant la prise de photos/vidéos et permet la formation aisée des utilisateurs de la plateforme ;
• Un agitateur orbital (Dutscher) nécessaire à la différentiation des organoïdes cérébraux est également installé dans l’un des incubateurs.

Les membres de la plateforme et ses utilisateurs bénéficient également de l’ensemble des équipements de l’Institut Jacques Monod notamment :

• Un cryostat Leica CM3050S (datant de 2004)
  Après formation par Kamal Bouhali, Mikaelle Bocel ou Vanessa Ribes ce système est réservable en ligne
• Un système de transfection (Nucleofector 4D) permettant la nucléofection des lignées iPSC et la génération des lignées transgéniques.
  Après formation par Kamal Bouhali, ce système est réservable en ligne.

Services proposés

La plateforme propose une formation et un accompagnement des équipes de recherches sur :

• La culture des iPSC et le contrôle qualité de ces cultures ;
• Le développement de stratégies d’édition du génome (en collaboration avec la plateforme GENIE (http://parisepigenetics.com/gen/) ;
• La différentiation en organoïdes cérébraux et spinaux ainsi que la caractérisation phénotypique de ces organoïdes ;
• Elle accueille également des stagiaires de différentes formations (BTS, Master).