Cellule d’Ingénierie Génétique et d’Expression (CIGEx)

Présentation

Elle fait partie du réseau de plateformes de l’unité Stabilité Génétique, Cellules Souches et Radiations (SGCSR – UMR-E 008) située au CEA de Fontenay-aux-Roses (deuxième étage du bâtiment 5, sur le campus IRSN). Comme toutes les plateformes de l’unité, la plateforme CIGEx est ouverte à la communauté scientifique académique et industrielle.

Activités

Expertises

Notre plateforme dispose du savoir-faire et des équipements nécessaires à la réalisation des expériences de clonage moléculaire et de biochimie des protéines, de leur conception à la réalisation expérimentale. Notre équipe se compose de 4 personnes à temps complet et possède une expertise reconnue dans nos domaines d’expertise.

La plateforme CIGEx propose ses services dans les domaines suivant :
(1) Biologie moléculaire pour le clonage des gènes d’intérêt, pour la mutagenèse, pour l’ingénierie génétique ;
(2) Biochimie des protéines (expression dans différents systèmes, tests d’interaction, purification à homogénéité des protéines recombinantes) ;
(3) Design et de clonage des ARNg pour les expériences de CRISPR/Cas9 ;
(4) Préparation des banques pour le séquençage haut débit notamment pour les expériences de « single-cell RNA seq. » ;
(5) Production de lentivirus.

La plateforme CIGEx a été conçue avec comme objectifs de :
– fournir des outils et des technologies performantes ainsi qu’un savoir faire reconnu ;
– assurer un suivi informatisé de toutes les étapes et un contrôle de la qualité de chaque opération ;
– procurer un encadrement scientifique et technologique aux utilisateurs ;
– assurer la formation des étudiants et des scientifiques.

Equipements

Pour les prestations de Biologie Moléculaire, la plateforme CIGEx dispose de :
– 1 thermocycleur SimpliAmp (Thermofisher) ;
– 1 spectrophotomètre Nanodrop (Thermofisher) ;
– 1 incubateur-agitateur Minitron (Infors) ;
– 1 incubateur-agitateur Multitron (Infors) ;
– 1 centrifugeuse 5810R (Eppendorf) ;
– 1 système d’encapsulation de cellules Chromium (10x Genomics) ;
– les équipements permettant de réaliser des cultures cellulaires (hotte à flux laminaire, incubateur et centrifugeuse).

Pour les prestations de Biochimie des Protéines, la plateforme CIGEx dispose de :
– 1 système FPLC Akta Purifier 10 (Cytiva) ;
– 1 incubateur-agitateur Minitron (Infors) ;
– 1 incubateur-agitateur Multitron (Infors) ;
– 1 centrifugeuse 5810R (Eppendorf) ;
– 1 centrifugeuse haute vitesse RC6+ (Thermofisher) ;
– 1 ultracentrifugeuse Optima XE90 (Beckman) ;
– les équipements permettant de réaliser des cultures de cellules d’insectes (hotte à flux laminaire, incubateur et centrifugeuse).

Services proposés

L’équipe de la plateforme CIGEx est à l’écoute des demandeurs et proposera les technologies adaptées pour répondre au mieux aux projets déposés.

Les prestations de la plateforme CIGEx en biologie moléculaire vous permettront de réaliser :
– le clonage moléculaire et la mutagenèse de gène(s) d’intérêt en utilisant les technologies les plus appropriées à chaque demande (GatewayTM, SLIC, Gibson-CloningTM, Restriction-ligation, « Rollingcircle ») ;
– l’ingénierie moléculaire de vos plasmides ;
– le design et le clonage des ARNg pour vos expériences de CRISPR/Cas9 ;
– la préparation des banques pour le séquençage haut débit dans le cadre d’expériences de “Single-cell RNA Seq”.

Les prestations de la plateforme CIGEx en biochimie des protéines vous permettront de réaliser :
– la production de vos protéines recombinantes d’intérêt dans les systèmes d’expression bactérien et de cellules d’insecte infectées par des baculovirus ;
– de réaliser des tests d’interaction par « pull-down » (IMAC, GST) ou par immuno-précipitation.

Enfin la plateforme CIGEx propose une prestation de production de lentivirus.